メゾ複雑体のストイキオメトリーを計測する超高感度定量プロテオミクス技術の開発
増田 豪
慶應義塾大学 先端生命科学研究所 特任講師
計画研究の概要
メゾ複雑体もしくは複合体を構成するタンパク質群の存在比率(ストイキオメトリー)を計測するために、1細胞からでもタンパク質複合体を濃縮できる技術を構築するとともに、前年度までの本領域に参画して構築した超高感度プロテオミクス技術をさらに高感度化することで10 zmolレベルのタンパク質複合体構成因子の存在比率を同定する。構築する技術は、我々が構築した1細胞プロテオミクス技術に加えて、免疫沈降およびビオチン近接標識法を基盤とする。生命現象を正確に理解するには細胞内分子動態の構造を観察することに加えて、その現象に関与するタンパク質群の存在比率を計測する必要がある。本申請課題を達成することで、メゾスケールな生命現象の解明を大きく進展させることができる。また、本技術を元に領域内共同研究を積極的に行うことで、当該研究領域の推進に貢献できると考えられる。
主な研究業績
- T. Masuda, Y. Inamori, A. Furukawa, M. Yamahiro, K. Momosaki, C-H. Chang, D. Kobayashi, H. Ohguchi, Y. Kawano, S. Ito, N. Araki, S-E. Ong, and S. Ohtsuki. Water droplet-in-oil digestion method for single-cell proteomics. Analytical Chemistry, (2022).
- T. Masuda, S. Ito, and S. Ohtsuki. Advances in sample preparation for membrane proteome quantification. Drug Discovery Today: Technologies, 39, 23-29 (2021).
- T. Masuda, A. Mori, S. Ito, and S. Ohtsuki. Quantitative and targeted proteomics-based identification and validation of drug efficacy biomarkers, Drug Metabolism and Pharmacokinetics, 36, 100361, (2021).
- T. Masuda, N. Sugiyama, M. Tomita, S. Ohtsuki, and Y. Ishihama. Mass spectrometry-compatible subcellular fractionation for proteomics, Journal of proteome research, 19 (1), 75-84 (2019).
- T. Masuda, T. Hoshiyama, T. Uemura, M. Hirayama-Kurogi, S. Ogata, A. Furukawa, P-O. Couraud, T. Furihata, S. Ito, and S. Ohtsuki. Large-Scale Quantitative Comparison of Plasma Transmembrane Proteins between Two Human Blood–Brain Barrier Model Cell Lines, hCMEC/D3 and HBMEC/ciβ, Molecular Pharmaceutics, 16 (5), 2162-2171 (2019)
- T. Masuda, X. Wang, M. Maeda, M.C. Canver, F. Sher, A. PW Funnell, C. Fisher, M. Suciu, G. E Martyn, L. J Norton, C. Zhu, R. Kurita, Y. Nakamura, J. Xu, D. R Higgs, M. Crossley, D. E Bauer, S. H Orkin, P. V Kharchenko, and T. Maeda, Transcription factors LRF and BCL11A independently repress expression of fetal hemoglobin, Science, 351 (6270), 285-289 (2016)